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多層囊泡 (MLV) 的制備

發(fā)布時(shí)間: 2023-10-24  點(diǎn)擊次數(shù): 682次

 

以下是用于制備脂質(zhì)體的凍干(冷凍干燥)脂質(zhì)混合物的方案的簡(jiǎn)要概述:

  1. 將脂質(zhì)溶解在氯仿中。

  2. 以適當(dāng)?shù)谋壤旌现|(zhì)。

  3. 使用干燥氮?dú)饬餍⌒恼舭l(fā)有機(jī)溶劑。

  4. 將脂質(zhì)混合物重新懸浮在環(huán)己烷中。如果混合物未全部溶解在環(huán)己烷中,則添加少量乙醇(環(huán)己烷體積的 1-2%)。不要使用過多的乙醇,因?yàn)檫^量的乙醇不會(huì)使溶液凍結(jié)。

  5. 使用干冰冷凍環(huán)己烷溶液。

  6. 快速將冷凍混合物置于高真空系統(tǒng)(凍干系統(tǒng))上。一般來說,“室內(nèi)真空"系統(tǒng)對(duì)于這個(gè)過程來說不夠強(qiáng)大。樣品應(yīng)保持冷凍狀態(tài)直至全部干燥;如果樣品開始解凍,則可能是真空不夠強(qiáng),或者存在太多乙醇。解凍的樣品不會(huì)產(chǎn)生白色粉末,并且可能會(huì)從小瓶中隆起或起泡。

  7. 將樣品放在真空系統(tǒng)上 3-5 小時(shí)(取決于使用的環(huán)己烷量)或直到樣品全部干燥(從真空中取出時(shí),小瓶摸起來或環(huán)己烷的氣味不應(yīng)感覺冷)。注意:這會(huì)產(chǎn)生干燥的白色粉末,很容易懸浮在水中。另一種方法是使用適當(dāng)?shù)乃跃彌_液重新懸浮通過蒸發(fā)氯仿而產(chǎn)生的脂質(zhì)膜。

  8. 將脂質(zhì)混合物懸浮在水性緩沖液中(緩沖液溫度應(yīng)高于脂質(zhì)的相變溫度),并讓混合物在脂質(zhì)的相變溫度以上水合 30-60 分鐘(偶爾渦旋)。該過程產(chǎn)生大的多層囊泡(LMV 或 MLV)。對(duì)于要包埋的水溶性化合物,遵循相同的方案,不同之處在于將化合物溶解在用于重構(gòu)干脂質(zhì)的水性緩沖液中,并且通過凝膠過濾除去外部化合物(未封裝的)。

參考

Frank Szoka, Jr. 和 Demetrios Papahadjopoulos,(1980),“脂質(zhì)囊泡(脂質(zhì)體)的比較特性和制備方法",Ann。生物物理學(xué)牧師。生物工程。,9:467-508。

 

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